- Код статьи
- S0233475525010058-1
- DOI
- 10.31857/S0233475525010058
- Тип публикации
- Статья
- Статус публикации
- Опубликовано
- Авторы
- Том/ Выпуск
- Том 42 / Номер выпуска 1
- Страницы
- 53-60
- Аннотация
- Фосфатидилсерин (ФС)-положительные тромбоциты играют важную роль в тромбозе и гемостазе. Они имеют высокую прокоагулянтную активность, способность к везикуляции и могут агрегировать с активированными ФС-отрицательными тромбоцитами. Они обнаруживаются в растущем тромбе in vitro, однако остается ряд загадок, связанных с ними. В частности, внутриклеточная сигнализация и реорганизация цитоскелета в этих тромбоцитах исследованы очень слабо, поскольку они разрушаются при пермеабилизации, необходимой для проникновения антител к внутриклеточным маркерам. В данной работе мы предлагаем подход, который позволяет анализировать внутриклеточные маркеры в индуцированных кальциевым ионофором А23187 ФС-положительных тромбоцитах с помощью проточной цитометрии или конфокальной микроскопии. Мы использовали наиболее мягкую пермеабилизацию фиксированных ФС-положительных тромбоцитов с помощью сапонина и показали, что такая пермеабилизация позволяет в значительной мере сохранить ФС-положительные тромбоциты. Для примера мы проанализировали состояние полимеризованной формы актина в ФС-положительных тромбоцитах и показали, что несмотря на значительную перестройку цитоскелета, происходящую при активации в таких тромбоцитах, актин в них частично представлен в полимеризованной форме.
- Ключевые слова
- гемостаз тромбоциты фосфатидилсерин проточная цитометрия конфокальная микроскопия
- Дата публикации
- 17.09.2025
- Год выхода
- 2025
- Всего подписок
- 0
- Всего просмотров
- 16
Библиография
- 1. Bevers E.M., Tilly R.H., Senden J.M., Comfurius P., Zwaal R.F. 1989. Exposure of endogenous phosphatidylserine at the outer surface of stimulated platelets is reversed by restoration of aminophospholipid translocase activity. Biochemistry. 28 (6), 2382–2387. doi 10.1021/bi00432a007
- 2. Kotova Y.N., Ataullakhanov F.I., Panteleev M.A. 2008. Formation of coated platelets is regulated by the dense granule secretion of adenosine 5'diphosphate acting via the P2Y12 receptor. J. Thromb. Haemost. 6 (9), 1603–1605. doi 10.1111/j.1538-7836.2008.03052.x
- 3. Podoplelova N.A., Nechipurenko D.Y., Ignatova A.A., Sveshnikova A.N., Panteleev M.A. 2021. Procoagulant platelets: Mechanisms of generation and action. Hamostaseologie. 41 (2), 146–153. doi 10.1055/a-1401-2706
- 4. Dale G.L. 2005. Coated-platelets: An emerging component of the procoagulant response. J. Thromb. Haemost. 3 (10), 2185–2192. doi 10.1111/j.1538-7836.2005.01274.x
- 5. Sinauridze E.I., Kireev D.A., Popenko N.Y., Pichugin A.V., Panteleev M.A., Krymskaya O.V., Ataullakhanov F.I. 2007. Platelet microparticle membranes have 50- to 100-fold higher specific procoagulant activity than activated platelets. Thromb. Haemost. 97 (3), 425–434.
- 6. Yakimenko A.O., Verholomova F.Y., Kotova Y.N., Ataullakhanov F.I., Panteleev M.A. 2012. Identification of different proaggregatory abilities of activated platelet subpopulations. Biophys. J. 102 (10), 2261–2269. doi 10.1016/j.bpj.2012.04.004.
- 7. Nechipurenko D.Y., Receveur N., Yakimenko A.O., Shepelyuk T.O., Yakusheva A.A., Kerimov R.R., Obydennyy S.I., Eckly A., Léon C., Gachet C., Grishchuk E.L., Ataullakhanov F.I., Mangin P.H., Panteleev M.A. 2019. Clot contraction drives the translocation of procoagulant platelets to thrombus surface. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 39 (1), 37–47. doi 10.1161/ATVBAHA.118.311390
- 8. Gaffet P., Bettache N., Bienvenüe A. 1995. Phosphatidylserine exposure on the platelet plasma membrane during A23187-induced activation is independent of cytoskeleton reorganization. Eur. J. Cell Biol. 67 (4), 336–345.
- 9. Verhallen P.F., Bevers E.M., Comfurius P., Zwaal R.F. 1987. Correlation between calpain-mediated cytoskeletal degradation and expression of platelet procoagulant activity. A role for the platelet membrane-skeleton in the regulation of membrane lipid asymmetry? Biochim. Biophys. Acta. 903 (1), 206–217. doi 10.1016/0005-2736(87)90170-2
- 10. Artemenko E.O., Yakimenko A.O., Pichugin A.V., Ataullakhanov F.I., Panteleev M.A. 2016. Calpain-controlled detachment of major glycoproteins from the cytoskeleton regulates adhesive properties of activated phosphatidylserine-positive platelets. Biochem. J. 473 (4), 435–448. doi 10.1042/BJ20150779
- 11. Dale G.L., Friese P., Batar P., Hamilton S.F., Reed G.L., Jackson K.W., Clemetson K.J., Alberio L. 2002. Stimulated platelets use serotonin to enhance their retention of procoagulant proteins on the cell surface. Nature. 415 (6868), 175–179. doi 10.1038/415175a.
- 12. Pasquet J.M., Dachary-Prigent J., Nurden A.T. 1998. Microvesicle release is associated with extensive protein tyrosine dephosphorylation in platelets stimulated by A23187 or a mixture of thrombin and collagen. Biochem. J. 333 (Pt 3)(Pt 3), 591–599. doi 10.1042/bj3330591
- 13. Rochat S., Alberio L. 2015. Formaldehyde-fixation of platelets for flow cytometric measurement of phosphatidylserine exposure is feasible. Cytometry A. 87 (1), 32–36. doi 10.1002/cyto.a.22567
- 14. Jamur M.C., Oliver C. 2010. Permeabilization of cell membranes. Methods Mol. Biol. 588, 63–66. doi 10.1007/978-1-59745-324-0_9
